在Western Blotting中,利用内参其实是用与WB过程中其他内参对应的抗体检测内参难白,例如,在检测目标产品的同时,能够检测内参的表现,是因为内参在各组织和细胞中的表现相对固定,因此检测每个样品的内参量,如虚盘定量的结果,用于补正上述误差。我们知道,只有能够,才能更加可靠。
此外,还可以将内参做成空白照片,检测乱白电膜的定型是否完全,整个Western Blot显色或发光系统是否常见。
常用的细胞总卵白量内参有GAPDH和细胞骨架难白β-质素或β-图布林等。对于一些动物的标本,特殊的动物Actin卵白应该由内参制成。
当样品中只是核卵白,而不是细胞总卵袋提取液时,可以使用早卵白H(Histone H)或细胞核抗原(PCNA)等作为核内三抗体增殖。当线粒体对线粒体的线粒体进行细微情况研究时,需要提取线粒体的总卵袋,以检测目标卵白的含量,此时通常的细胞总卵白内参并不适合。我们选举线粒体总兰白的内三抗体。关于线粒体卵白的检测,经常使用COX IV或VDAC1作为内参抗体,那里COX IV又是被引用最多的线粒体体内参。
COX IV的检测分子量大约在16kD左右,比力适合在更大的WB尝试中检测目标难白。
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