菌种活化就是将收藏形态的菌种放入适宜的培育提拔基中培育提拔,逐级扩大培育提拔得到纯而壮的培育提拔物,即获得活力兴旺的、接种数量足够的培育提拔物。菌种发酵有一般需要2-3代的复壮过程,因为保留时的前提往往和培育提拔时的前提不不异,所以要活化,让菌种逐步适应培育提拔情况。
一般菌种临时存放及活化
1. 低温保留管应存放于-20℃ ~ -80℃之低温前提下。
2. 筹办 37℃之 70﹪酒精浴槽(只能在电气水浴槽中改放酒精,不成以火加温,以免危险;若以 37℃水浴代替,应制止水中微生物污染),此中事先安顿小试管架,液面不成高达管塞。
3. 将低温保留管从低温保留前提中取出,置于 37℃浴槽之小试管架上。
4. 不竭轻细摇动低温保留管,液面不成高至管塞,曲至结冰完全化解(约需 2 分钟)。
无菌培育提拔
1。用无菌微量吸管,从已化解之低温保留管 吸收 1-2滴之菌液,滴入固态指定培育提拔基某一边沿附近,以划线法接种于培育提拔基。
2。将接种好的培育提拔基置于指定温度的培育提拔箱中培育提拔。
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平板划线别离法
平板划线别离法是指把稠浊在一路的微生物或统一微生物群体中的差别细胞用接种环在平板培育提拔基外表通过火区划线稀释而得到较多独立散布的单个细胞,经培育提拔后生长繁衍成单菌落,凡是把那种单菌落当做待别离微生物的纯种。有时那种单菌落并不是都由单个细胞繁衍而来的,故必需频频别离屡次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培育提拔基外表屡次做“由点到线”稀释而到达别离目标的。
1. 手持金属接种环,用酒精灯将接种环(共约5公分)烧至火红,其实不断来回烧烤金属固定杆之前约10cm,期待约10秒钟,将接种环前端轻触培育提拔基边沿凝胶(无菌体部分),待接种环完全冷却后,以环沾黏菌滴,由培育提拔基边沿向中央悄悄横划紧接的并行线,曲到涵盖1/3培育提拔基为行。
2. 灼烧接种环,待数秒冷却后,扭转培育提拔基自I区涂布的边沿再横划数条线到未接种的区域。
3. 反复2的动做完成。
4. 灼烧接种环,将接种环归位。
(1)金属接种环
(2)平板划线法
一般操做过程
1、在无菌操做下,用无菌微量吸管,从已化解的管中吸收50μL(或1-2滴)的菌液,滴入固态指定培育提拔基(培育提拔基编号及温度示于菌株订购单)某一边沿附近,以划线法接种于培育提拔基。
2、将接种好的培育提拔基置于指定温度的培育提拔箱中培育提拔。
3、在无菌情况下,以沾有75%酒精的棉花擦拭外管,在火焰上加热外管之尖端。滴数滴无菌水于加热处,使外管分裂,再以硬棒敲破尖端。取出隔热纤维纸和内管,以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。
4、(a)适用于细菌用无菌吸管,吸收0.3-0.5mL指定之液体培育提拔基,滴入内管内,并轻细震荡(可用该吸管协助),曲到平均悬浮。(b)适用于霉菌、酵母菌用无菌吸管,吸收0.3-0.5mL无菌水,滴入内管内,待枯燥粉末化解后,以无菌吸管吸收并滴入约含有5ml无菌水之试管内,轻细震荡使其平均后,静置30至60分钟。
5、取0.1-0.2mL之菌体悬浮液于指定的平板培育提拔基上,做划线别离培育提拔或做成一系列之稀释,用无菌L型玻棒平均涂抹,以查验菌种之纯度及活化情形,而剩余的菌体则全数移入指定的液体培育提拔基内,并依指定的温度培育提拔之。
6、某些菌种颠末冷冻枯燥保留后,迟滞期较长,必需等培育提拔二倍时间后才气长出,且再颠末一、二次继代培育提拔后才气一般生长。颠末以上的勤奋后仍培育提拔失败,才视为不克不及活化。
7、未开封之冷冻枯燥管,请冷藏于4℃冰箱,切勿冷冻保留。
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